更新時間: | 2019-04-18 |
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廠商性質: | 生產廠家 |
葡萄糖含量試劑盒測定原理:葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。
分光光度法 50 管/48 樣
葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯yi能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化
4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水
試劑一:0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 25ml×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 25ml×1 瓶,4℃保存;
1、組織的處理:按照組織質量(g):蒸餾水體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,加入 1mL 蒸餾水),研磨成勻漿,95℃水浴 10 分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后, 8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。
2、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):蒸餾水體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復 30 次),95℃水浴 10 分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。
1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至505nm,蒸餾水調零。
2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合,用多少配多少。
3、加樣表(在 EP 管中加入下列試劑):
試劑(μL) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
樣本 |
|
| 100 |
試劑一 |
| 100 |
|
蒸餾水 | 100 |
|
|
混合試劑 | 900 | 900 | 900 |
混勻,置 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴中,保溫 15min,于505nm 波長處讀取吸光度。空白管、標準管和測定管吸光值分別記為A1、A2 和 A3??瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?。
1、按樣本蛋白濃度計算
葡萄糖含量(µmol/mg prot)=(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷Cpr。
2、按樣本鮮重計算
葡萄糖含量(µmol/g 鮮重)= (C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷ (A2-A1)÷W
3、按細菌或細胞密度計算
葡萄糖含量(µmol/ 104 cell)= (C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷ (A2-A1)
C 標準:標準管濃度,0.5µmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;
Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。
注意:低檢測限為 50nmol/g 鮮重或 0.5nmol/mg prot
糖原含量說明書