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口腔/咽拭子基因組DNA快速提取操作步驟
點擊次數:7239 更新時間:2021-03-10

口腔/咽拭子基因組DNA快速提取試劑盒

Rapid Swab DNA Kit

 

 

保存條件:本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果. 蛋白酶 K 可室溫運輸,建議-20℃長期保存。

產品介紹:

本試劑盒采用特制的進口DNA 吸附柱和*的緩沖液系統,特別適合于從口腔咽拭子中分離純化基因

DNA。各種來源樣品裂解消化處理后 DNA 在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜(

別配備了 Carrier RNA 可以從體系中輕松捕獲微量核酸,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、

細胞代謝物、蛋白等雜質去除,后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組 DNA 從硅基質膜上洗脫。純化后的

DNA 無雜質和 PCR 抑制劑,可直接適用于PCR 分析。

產品特點:

  • 配備了 Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
  • 提取的 DNA 純度高,質量穩定可靠,可適用于各種常規操作,包括 PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

注意事項:

1. 結合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現析出和沉淀,可以在 37℃水浴幾分

鐘幫助重新溶解,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時間暴露于空氣中發生揮發、氧化、pH 值變化。

3. Carrier RNA

1) Carrier RNA 使用方法:如果起始處理量很少(口腔咽拭子上收集到的細胞很少,我們推薦使用 Carrier RNA,如果預期有較大量 DNA 產量,用戶可以根據需要選擇是否加入 Carrier RNA。使用時每個樣品提取所需結合液 CB 中加入 1μl Carrier

RNA 儲存溶液, 將結合液 CB Carrier RNA 溶液充分顛倒混勻即可(結合液 CB 容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據樣品數量,在總共需要的結合液CB 中加入總共需要的 Carrier RNA 混勻備用?;旌弦涸谑覝?/font> 24 小時內穩定。

  • Carrier RNA 加入過多造成 DNA 洗脫液中 Carrier RNA 濃度過高,下游 PCR 反應可能受干擾,加入過少可能并不能幫助提高 DNA 產量和 PCR 敏感度,因此加入量應該在具體試驗中調整以得到-*佳效果。

自備試劑:無水乙醇

操作步驟:

提示:-*次使用前請先在15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇,充分混勻,加入后請及時在方框

打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!

取樣:取一根醫用消毒棉簽手不要碰觸脫脂棉部位,伸進口腔,緊靠臉頰內側來回刮拭20 次(不

時旋轉棉棒,需充分接觸口腔粘膜。

注意事項:避免用手觸及棉簽,采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染,取樣前

30 min 內應該避免進食或者飲水。

1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下,放入2ml 離心管中,加入400μl 裂解液 ML。

2. 再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻渦旋振蕩充分混勻56℃放置 30 min,期間每 10 min 

旋混勻 10 sec。

 

3. 加入 400μl 結合液 CB,立刻渦旋振蕩充分混勻,70℃放置 10 min(擠壓去除拭子, 將盡可能多的裂

 

解液轉移至新的離心管中

如果拭子上細胞數量少,導致提取的基因組 DNA 產量過低, 可以在400μl 結合液CB中加入 1μl Carrier RNA 儲存溶液。

4. 冷卻后加 200μl 無水乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內壁的液滴,收集所有的液體

到管底如果周圍環境高于 25,乙醇需要冰上預冷后再加入

 5. 將上一步混合物中加入一個吸附柱AC (吸附柱放入收集管中,12,000rpm 離心30-60 sec,倒掉收

集管中的廢液。

6. 加入500μl 抑制物去除液IR12,000rpm  離心 30 sec,棄廢液。

7. 加入500μl 漂洗液WB請先檢查是否已加入無水乙醇!,12,000rpm  離心30 sec,棄掉廢液。

8. 重復操作步驟 7。

9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心2min,將吸附柱置于室溫放置數分鐘,以*晾干吸附

材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

10. 取出吸附柱AC,放入一個干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位 20-50μl 洗脫緩沖液 EB 洗脫緩

沖液事先在65-70℃水浴中預熱效果更好, 室溫放置 1 min,12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置1 min,12,000rpm 離心1 min。

洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要DNA 濃度較高,可以適當減少洗脫體積, 但是小體積不應少于 20μl,體積過小降低DNA 洗脫效率,減少DNA 產量。注意:DNA 產物應保存在-20℃,以防 DNA 降解

DNA 濃度及純度檢測

得到的基因組DNA** 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收 得到的DNA** 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。

DNA 應在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當于大約50μg/ml 雙鏈DNA、

40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用滅菌水比值會偏低,因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。

 

 

 

                   本產品僅供科研不用于臨床診斷

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區嗜銀-AGNOR染色實驗服務

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯免疫(ELISA)技術服務

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術服務

 

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

免疫細胞化學ICC實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務

PKC活性檢測實驗

非標定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務

 

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